上期文章我们谈到了在间充质干细胞（MSC）的应用和药物申报过程中，要对MSC进行安全评估，染色体核型分析是安全性评估中不可缺少的一环，它能判断MSC是否出现任何变异或者是功能上出现异常，保证MSC应用的安全性。

MSC具有多项分化潜能、免疫调节作用（低免疫原性）、促进组织器官的修复等特点，基于这三个功能特性，MSC在临床医学、再生医学等领域备受关注。其中，MSC免疫原性低这个特性使它在临床中前景一片火热。

正因如此，在MSC的应用程序中，异常免疫学检测至关重要，这一大项检测中又分为很多的小项，由于篇幅原因，我们采取上、中、下三篇来详细介绍这部分内容。

一、MSC对Th1的抑制率

1、实验原理

Th1辅助细胞主要为对抗细胞内细菌及原虫的免疫反应，主要为白介素12所驱动诱发，其主要的执行的细胞因子是IFN-γ，Th1能够控制炎性免疫应答，清除细胞内病原体。

MSC通过抑制Th1型促炎因子如TNF-α,IFN-γ的表达,并增强 Th2型抗炎因子如IL-10的表达来发挥免疫调节作用。另外,MSC可以通过表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)诱导Th2细胞的分化和成熟,从而导致色氨酸耗竭以及色氨酸代谢产物的产生,而色氨酸代谢产物也促进了Th1细胞的凋亡。

2、下游应用

Th1是具有免疫促进作用的辅助性T细胞，Th1免疫反应对应的是第四型自体免疫疾病,也就是过分的Th1激活将会导致巨噬细胞自体免疫疾病,比如麻风病或结核菌素过分反应或第一型糖尿病等。目前已有研究发现，MSC可以通过抑制Th1细胞的增殖，来治疗这类自身免疫疾病，这也是目前自身免疫性疾病治疗的热门方向。

此外，也有研究表明MSC外泌体在肿瘤治疗方面的作用。实验表明将骨髓间充质干细胞来源外泌体和外周血单核细胞进行共培养，发现其能促进Th1向Th2方向转换，显著减少促炎因子白细胞介素13和肿瘤坏死因子a水平，提高抗炎性转化生长因子水平。

3、友康GMP级培养基产出细胞实验结果

为验证友康GMP体系培养出的MSC是否具备良好的免疫抑制与调节能力，需检测MSC是否对Th1细胞有比较好的抑制率。通过友康的GMP级MSC无血清培养基培养得到的MSC，经过严格的检测，其对Th1的抑制率达到了89.96%。

抑制率=[(单阳-单阴)-(共培养阳-共培养阴)] /（单阳-单阴）=89.96%

二、MSC对Th17的抑制率

1、实验原理

Th17辅助细胞是一种新发现的能够分泌白介素17的T细胞亚群，在自身免疫性疾病和机体防御反应中具有重要的意义。Th17辅助细胞主要为对抗细胞外细菌及霉菌的免疫反应，其主要为白介素6及TGFβ所驱动诱发。

目前，关于MSC对Th17抑制作用的机制尚不明确。有研究表明，在小鼠自身免疫性脑脊髓炎模型中，MSC可以通过依赖于 CCL2的方式抑制 Th17 细胞的生成。也有研究发现，MSC能够诱导CD4+T细胞的Foxp3蛋白表达增加，将进一步抑制视黄酸相关的孤儿受体γt基因相关功能区域的去甲基化，从而抑制了CD4+T向Th17的分化。

2、下游应用

Th17 细胞是一类产生IL-17 的Th 细胞亚群，与许多炎症反应和自身免疫性疾病的发生和发展有关。大量研究表明，IL-17与实验性自身免疫性脑炎、哮喘、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病明显相关。Th17细胞分泌的IL-17可以促进动物模型中实验性自身免疫性脑炎的形成；在类风湿性关节炎患者中，疾病的活动性与 Th17细胞的数量以及IL-17的水平呈正相关。因此，通过MSC对Th17的抑制作用，可以为这类难治性疾病带来治愈的希望。

此外，也有研究显示出MSC在炎症性肠病（IBD）治疗方面的进展。Th17 细胞是T细胞的促炎亚型,当Th17细胞过多时会导致组织损伤,同时IL-17的表达明显增加，而IL-17是IBD 发生的关键性因素，它可以使中性粒细胞聚集到周围组织,以放大局部炎症。研究表明,在IBD的动物模型中应用MSC后，IL-17 的表达明显降低，同时也降低了脾脏中IL-17/IFN-γ产生细胞的频率，减少了中性粒细胞在肠道中的积累。另外，MSC可抑制信号转导和转录激活因子3通路,使 IL-17 的表达下降,从而抑制 Th17细胞的分化,促进 IBD损伤组织的修复。

3、友康GMP级培养基产出细胞实验结果

友康的GMP级MSC无血清培养基培养得到的MSC，经过免疫学检测，其对Th17的抑制率达到了46.90%。而与同类进口产品对比，进口竞品在对Th17的抑制率检测中，大约在30～40%。由此可见，友康的GMP级MSC无血清培养基在免疫调节方面的作用是非常完备的。

抑制率=[(单阳-单阴)-(共培养阳-共培养阴)] /（单阳-单阴）=46.90%

免疫抑制能力为当下MSC药物申报最为广泛利用的生物学特性之一，而具有活性的细胞药物的一大优势是在细胞某一优势的基础上继续延展开发，扩展细胞的基础生物学潜能而达到特异性治疗某一适应症的目的。以上的验证实验是我们没有干预细胞的情况下，做出的细胞免疫抑制基础性能，相信下游用户在优化细胞的工艺学及输送载体情况下，能够更好地发挥细胞的免疫调控功能，在炎症抑制领域做深入开发。

参考文献

李宁, 金世柱,and 杨宁宁."间充质干细胞通过免疫调节机制治疗炎症性肠病的研究进展." 中国比较医学杂志 31.12(2021):121-125.

陈剑潇.间充质干细胞对旁分泌TGFβ1调控Th17/Treg影响ARDS炎症反应及免疫功能的研究.2020.东南大学,PhD dissertation.

刘春燕.骨髓间充质干细胞抑制Th0细胞向Th17细胞分化的研究.2018.苏州大学,MA thesis.

陈万程.骨髓间充质干细胞来源的外泌体的免疫调节功能研究.2016.南方医科大学,MA thesis.

郑翠玲, et al."流式细胞术研究间充质干细胞对人Th1细胞的作用." 中国实验血液学杂志 20.03(2012):697-702.