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2023-04-19
公司热点前几期文章我们详细介绍了间充质干细胞（MSC）在细胞的基本干性、核型检测、免疫抑制与调节能力等方面的特性，还用真实数据展示了友康GMP级MSC无血清培养基在支持MSC的这些特性上具有良好的性能。
本期文章我们仍然从MSC的质量检验上入手，分析MSC在端粒酶活性检测中的实验结果，进一步展示这款GMP级培养基的安全性能。
一、端粒与端粒酶
端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构。端粒有重要的生物学功能，可稳定染色体的功能，防止染色体DNA降解、末端融合，保护染色体结构基因DNA，调节正常细胞生长。端粒长短和稳定性决定了细胞寿命，并与细胞衰老和癌变密切相关。
端粒酶是一种由催化蛋白和RNA模板组成的酶，可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端，把DNA复制损失的端粒填补起来，使端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂的次数增加。
二、端粒酶活性检测的意义
端粒酶活性检测是MSC的致瘤性检验中的一项。端粒酶与细胞的增生、分化和不死性有着极为密切的关系，已成为目前肿瘤和衰老基础研究的热点之一。端粒酶除了在少数分裂比较快的细胞（如生殖细胞、造血细胞）中表达，一般在正常细胞中不表达，在大多数恶性肿瘤组织有较高水平表达。
理论上机体任何一个组织均有发生肿瘤的可能，临床上对MSC来源的肿瘤知之尚少，目前的研究指向人体的尤文氏瘤等骨肉瘤系来源于MSC。目前多数的研究报道认为采用原代、P1~P3 的MSC进行治疗，可避免其致瘤性的发生。为了更进一步避免MSC致瘤的可能性，我们就要对细胞进行致瘤性检验，确保应用到临床和研究上的细胞是安全可靠的，而端粒酶活性与细胞癌变的发生密切相关，该项检测也就成了其中不可缺少的检验之一。
端粒酶活性检测标准 |
广东省干细胞与再生医学协会团体标准-人脐带间充质干细胞质量检定标准(T/SRA 003-2019): 采用逆转录real-time PCR 方法通过PCR仪检测其是否表达端粒酶催化亚基基因 hTERT。hTERT 是端粒酶的核心，只表达于端粒酶阳性细胞，并且是端粒酶的限速因子，其 mRNA表达水平直接决定端粒酶的活性程度。采用实时定量荧光PCR的方法检测脐带间充质干细胞应无端粒酶(或非常微弱)表达。 深圳市细胞治疗技术协会团体标准-临床研究用人脐带来源间充质干细胞制剂规范(SZTT/SSCT 002-2018)：产品的两代次细胞端粒酶活性差异≤10%。 |
三、友康GMP级培养基产出细胞实验结果
为了确保友康的GMP级MSC无血清培养基培养出的细胞的安全性，我们选取了P5代次的细胞进行了端粒酶活性检测，检测结果为阴性，这表明友康的这款GMP级培养基在致瘤性检验中是安全的，极大程度降低了致瘤性发生的可能。
端粒的长短与细胞的衰老有着密切的关系，端粒越长细胞增殖能力越强，越不容易老化，端粒酶可以维持细胞的端粒稳定性。我们检测到的端粒酶活性为阴性，这是否说明了这款培养基培养出来的细胞容易老化、增殖能力弱呢？
并非如此，在本系列第二期文章中，我们展示了这款GMP级培养基培养出来的细胞形态图，哪怕是高代次的时候细胞也具有很好的形态，没有老化的征象，而且无需更换培养基，可以一传到底传至P20代次。这就说明了，细胞的安全性和它的增殖能力并不是负向的关系，而是可以兼顾的。
参考文献
李汉骏. Foxp1在骨髓间充质干细胞命运决定和衰老过程中的作用研究[D].上海交通大学,2017.
崔岩,李浩天,刘宗正,曹俊伟,张焱如. 端粒逆转录酶基因修饰对绵羊骨髓间充质干细胞端粒酶活性影响的研究[J]. 中国畜牧兽医,2015,42(06):1362-1369.
黄金棋,林艳娟. 间充质干细胞治疗自身免疫性疾病及其细胞生物治疗的致瘤性[J]. 中国组织工程研究与临床康复,2010,14(45):8478-8482.
